cystatin SA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406907

Panoramica

CST2 codifica la cistatina SA, un inibitore secreto delle proteasi cisteiniche che limita le catepsine di tipo papaina e la relativa attività proteolitica sulle superfici mucosali. Modulando l’equilibrio tra proteasi e antiproteasi, la cistatina SA contribuisce a regolare il turnover della matrice extracellulare, la processazione dei peptidi e la segnalazione infiammatoria nel microambiente orale e delle prime vie aero-digestive. Un’alterata espressione delle cistatine salivari è stata associata a cambiamenti nella difesa innata, nelle interazioni con il microbioma e nel rimodellamento tissutale legato alla proteolisi osservati in diverse condizioni infiammatorie e in fenotipi adiacenti al cancro. CST2 è quindi rilevante per lo studio di vie guidate dalle proteasi che influenzano la funzione di barriera epiteliale e la composizione del secretoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cystatin SA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CST2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CST2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CST2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cystatin SA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CST2 per lo studio della segnalazione di cystatin SA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CST2 critici per la funzione di cystatin SA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CST2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cystatin SA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cystatin SA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CST2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cystatin SA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cystatin SA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CST2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CST2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.