Cyp4f15 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-430669-ACT

Cyp4f15 codifica una monoossigenasi murina della famiglia del citocromo P450 4F che catalizza il metabolismo ossidativo dei lipidi endogeni, inclusa l’idrossilazione di acidi grassi ed eicosanoidi che modulano la segnalazione infiammatoria e l’omeostasi lipidica. In quanto enzima associato al reticolo endoplasmatico, Cyp4f15 contribuisce a reti di biotrasformazione di xenobiotici e lipidi che intersecano l’equilibrio redox, il rimodellamento dei lipidi di membrana e vie a valle di modulazione immunitaria. Un’alterata regolazione dell’ossidazione mediata da CYP4F può influenzare le risposte tissutali allo stress metabolico e agli stimoli infiammatori, rendendo Cyp4f15 un nodo utile per studiare il turnover dei mediatori lipidici nel fegato e in contesti rilevanti per il sistema immunitario. Questi processi sono spesso esplorati in modelli di disregolazione metabolica e fenotipi legati all’infiammazione, senza implicare esiti terapeutici.

Cyp4f15 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cyp4f15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cyp4f15 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cyp4f15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp4f15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cyp4f15. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cyp4f15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cyp4f15 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cyp4f15 nelle cellule tumorali con espressione di Cyp4f15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.