CYP2C9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403593-ACT

CYP2C9 codifica una delle principali monoossigenasi umane del citocromo P450, che catalizza il metabolismo ossidativo di diversi xenobiotici e lipidi endogeni, contribuendo alla clearance epatica dei farmaci e alle vie di bioattivazione. L’enzima opera nel reticolo endoplasmatico come parte della catena di trasferimento elettronico dei P450 e si integra con l’omeostasi redox, la segnalazione lipidica e le reti di detossificazione. La variabilità interindividuale nell’espressione e nell’attività di CYP2C9 è un determinante chiave della capacità metabolica e influisce sulla suscettibilità a reazioni avverse ai farmaci e alle interazioni tra farmaci. Un’alterata regolazione di CYP2C9 è studiata anche nel contesto di malattie epatiche, infiammazione e risposte allo stress indotto da xenobiotici che rimodellano i programmi genici del metabolismo.

CYP2C9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYP2C9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP2C9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYP2C9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYP2C9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP2C9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYP2C9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP2C9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP2C9 nelle cellule tumorali con espressione di CYP2C9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.