CYP24 Plasmide Double Nickase (h): sc-401233-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP24 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP24 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP24 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP24A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP24 Antibody (E-7): sc-365700
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP24 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401233-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP24 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401233-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP24A1 codifica l’enzima mitocondriale del citocromo P450 CYP24A1 (CYP24), un regolatore chiave del metabolismo della vitamina D che catalizza la 24-idrossilazione e la successiva inattivazione della 1,25-diidrossivitamina D3 e della 25-idrossivitamina D3. Controllando il turnover del calcitriolo, CYP24A1 modula programmi trascrizionali dipendenti dal VDR che influenzano l’omeostasi di calcio e fosfato, la differenziazione epiteliale e la segnalazione immunitaria. Alterazioni dell’attività di CYP24A1 sono state associate a una disregolazione della segnalazione della vitamina D e a perturbazioni del metabolismo minerale, e la sua espressione viene spesso valutata in contesti in cui l’equilibrio della via del VDR è compromesso, inclusi la biologia del cancro e gli stati infiammatori. In quanto P450 mitocondriale, CYP24A1 si interseca anche con i processi redox cellulari e con l’adattamento metabolico grazie alla sua dipendenza da partner di trasferimento di elettroni.
CYP24 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP24A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP24A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP24A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP24A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.