CYB5R3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404764-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYB5R3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYB5R3 Double Nickase Plasmid (h) e il CYB5R3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYB5R3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYB5R3 Antibody (G-11): sc-398043
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYB5R3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404764-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYB5R3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404764-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYB5R3 codifica la citocromo b5 reduttasi 3, una flavoproteina NADH-dipendente che trasferisce elettroni al citocromo b5 e ad altri accettori, supportando il metabolismo dell’eme e dei lipidi. Contribuisce all’omeostasi redox cellulare e influenza vie quali la desaturazione/elongazione degli acidi grassi, la biosintesi del colesterolo e la protezione dallo stress ossidativo tramite il mantenimento dei cofattori in forma ridotta. L’attività di CYB5R3 è inoltre collegata alla riduzione della metaemoglobina negli eritrociti e, più in generale, alla regolazione dei processi di trasferimento di elettroni nei mitocondri e nel reticolo endoplasmatico. Alterazioni genetiche o funzionali di CYB5R3 sono state associate alla metaemoglobinemia e a fenotipi correlati di squilibrio redox, rendendolo rilevante per lo studio delle carenze nel trasferimento di elettroni e delle risposte allo stress metabolico.
CYB5R3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYB5R3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYB5R3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYB5R3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYB5R3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.