Plasmide Double Nickase (h) CYB5R3: sc-404764-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CYB5R3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CYB5R3 Double Nickase (h) et le plasmide CYB5R3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CYB5R3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CYB5R3 Antibody (G-11): sc-398043
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CYB5R3 | sc-404764-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CYB5R3 | sc-404764-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYB5R3 code la cytochrome b5 réductase 3, une flavoprotéine dépendante du NADH qui transfère des électrons au cytochrome b5 et à d’autres accepteurs afin de soutenir le métabolisme de l’hème et des lipides. Elle contribue à l’homéostasie redox cellulaire et influence des voies telles que la désaturation/l’élongation des acides gras, la biosynthèse du cholestérol et la protection contre le stress oxydatif via le maintien de cofacteurs sous forme réduite. L’activité de CYB5R3 est également liée à la réduction de la méthémoglobine dans les érythrocytes et, plus largement, à la régulation des processus de transfert d’électrons au niveau des mitochondries et du réticulum endoplasmique. Une perturbation génétique ou fonctionnelle de CYB5R3 a été associée à la méthémoglobinémie et à des phénotypes connexes de déséquilibre redox, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les déficits de transfert d’électrons et les réponses au stress métabolique.
CYB5R3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYB5R3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYB5R3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYB5R3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYB5R3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.