CUL-4A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401967

Panoramica

CUL4A codifica per cullina-4A, un’impalcatura centrale del complesso ligasi E3 dell’ubiquitina CRL4 che coordina l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale di proteine che regolano la replicazione del DNA, la dinamica della cromatina e la progressione del ciclo cellulare. In associazione con proteine adattatrici come DDB1 e con molteplici recettori di substrato DCAF, CUL-4A regola processi quali la riparazione per escissione di nucleotidi, il “licensing” della replicazione e le risposte al danno al DNA indotto dai raggi UV. L’alterazione della proteostasi dipendente da CUL4A può compromettere la stabilità del genoma e il controllo dei checkpoint, collegando un’attività CRL4 aberrante a fenotipi associati al cancro e ad altri disturbi che coinvolgono difetti di riparazione del DNA. In quanto nodo centrale nella segnalazione mediata dall’ubiquitina, CUL-4A è spesso studiata in vie che collegano la regolazione della cromatina allo stress replicativo e al controllo trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CUL4A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CUL4A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CUL4A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CUL-4A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CUL4A per lo studio della segnalazione di CUL-4A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CUL4A critici per la funzione di CUL-4A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CUL4A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CUL-4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CUL-4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CUL4A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CUL-4A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CUL-4A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CUL4A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CUL4A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.