Csk Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419846

Panoramica

Csk (C-terminal Src kinase) è una tirosin-chinasi citosolica che fosforila la tirosina regolatoria C-terminale delle chinasi della famiglia Src, imponendo una conformazione autoinibita e limitando la segnalazione a valle. Modulando le vie dipendenti da Src, Csk influenza la segnalazione prossimale ai recettori, la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e le soglie di segnalazione dei recettori immunitari in molteplici tipi cellulari. Nei modelli murini, un’attività alterata di Csk perturba l’attivazione e la tolleranza dei linfociti e influisce su processi legati all’infiammazione e alla segnalazione oncogenica attraverso un’attivazione aberrante delle chinasi Src. Di conseguenza, Csk è ampiamente studiata come regolatore negativo centrale che collega la segnalazione di fattori di crescita e del sistema immunitario ai programmi di adesione, migrazione e proliferazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Csk (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Csk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Csk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Csk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Csk.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Csk per lo studio della segnalazione di Csk, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Csk critici per la funzione di Csk
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Csk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Csk CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Csk CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Csk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Csk Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Csk (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Csk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Csk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.