CRY2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403171-ACT

Il gene umano **CRY2** codifica la criptocromina 2, una flavoproteina sensibile alla luce blu che agisce come repressore centrale nel circuito circadiano di feedback trascrizionale–traduzionale. CRY2 regola l’espressione genica guidata da **CLOCK:BMAL1** interagendo con le proteine **PER** e modulando il turnover dipendente dall’ubiquitina, contribuendo così a plasmare i ritmi quotidiani del metabolismo, della temporizzazione del ciclo cellulare e della segnalazione ormonale. Attraverso l’accoppiamento con reti di modificazioni post-traduzionali, incluse la fosforilazione e la proteostasi mediata da ligasi E3, CRY2 influenza programmi trascrizionali nei tessuti periferici. Un’attività o un’espressione di CRY2 deregolata è stata associata ad alterazioni della regolazione sonno–veglia e a disallineamento circadiano collegato a fenotipi metabolici e neuropsichiatrici, rendendolo un nodo utile per studi incentrati sulle vie di segnalazione.

CRY2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CRY2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CRY2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CRY2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CRY2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CRY2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CRY2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CRY2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CRY2 nelle cellule tumorali con espressione di CRY2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.