CRP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401767-ACT

La proteina C-reattiva (CRP) è una pentrassina secreta prodotta principalmente dagli epatociti nell’ambito della risposta di fase acuta e funziona come molecola solubile di riconoscimento dei pattern, legandosi alla fosfocolina presente sulle superfici microbiche e sulle cellule danneggiate. Interagendo con i recettori Fcγ e attivando la cascata del complemento per via classica tramite C1q, la CRP collega il riconoscimento immunitario innato all’opsonizzazione, alla fagocitosi e all’amplificazione dell’infiammazione. L’espressione della CRP è indotta a livello trascrizionale da citochine pro-infiammatorie, in particolare dall’IL-6 con il contributo di IL-1β e TNF, integrando programmi di segnalazione guidati da JAK/STAT e NF-κB. Livelli deregolati di CRP sono ampiamente utilizzati come biomarcatore di infiammazione sistemica e sono associati a malattie cardiometaboliche, infezioni e patofisiologia autoimmune, a supporto di studi meccanicistici sulla regolazione dell’infiammazione.

CRP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CRP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CRP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CRP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CRP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CRP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CRP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CRP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CRP nelle cellule tumorali con espressione di CRP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.