CROP Plasmide Double Nickase (m): sc-426686-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CROP Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CROP Double Nickase Plasmid (m) e il CROP Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Luc7l3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CROP Plasmide Double Nickase (m) | sc-426686-NIC | 20 µg | $410.00 |
Luc7l3 codifica la proteina murina CROP, un fattore legante l’RNA implicato nello splicing del pre‑mRNA e nella regolazione della maturazione dei trascritti associata allo spliceosoma. Influenzando le scelte di splicing alternativo e l’elaborazione dell’mRNA, Luc7l3 può incidere sui programmi di espressione genica a valle coinvolti nelle transizioni di stato cellulare, nella segnalazione immunitaria e nella differenziazione. L’alterazione dei regolatori dello splicing è ampiamente collegata all’instabilità del trascrittoma e a una produzione proteomica modificata, processi spesso studiati nell’infiammazione, nell’ematopoiesi e nelle disregolazioni legate al cancro. Luc7l3 rappresenta quindi un nodo utile per indagare come il controllo spliceosomiale plasmi l’attività delle vie di segnalazione e il fenotipo nelle cellule dei mammiferi.
CROP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Luc7l3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Luc7l3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Luc7l3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Luc7l3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.