CREM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400406

Panoramica

CREM (cAMP response element modulator) è un fattore di trascrizione bZIP della famiglia CREB/ATF che si lega agli elementi di risposta al cAMP per regolare programmi di espressione genica dipendenti dagli stimoli. Integrando la segnalazione cAMP/PKA con input legati al calcio e alle MAPK, CREM modella gli esiti trascrizionali che influenzano proliferazione cellulare, differenziamento e risposte allo stress. CREM è particolarmente importante nella biologia endocrina e riproduttiva, inclusa la regolazione della spermatogenesi e dell’espressione genica neuroendocrina, e la sua attività specifica per isoforma può oscillare tra attivazione e repressione trascrizionale. Una segnalazione di CREM deregolata è stata associata ad stati trascrizionali immunitari e infiammatori alterati ed è stata studiata in contesti quali la disfunzione endocrina, i meccanismi legati all’infertilità e vie rilevanti per le malattie neuropsichiatriche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CREM (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CREM in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CREM insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CREM a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CREM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CREM per lo studio della segnalazione di CREM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CREM critici per la funzione di CREM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CREM per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CREM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CREM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CREM. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CREM Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CREM (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CREM per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CREM definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.