CPT1-C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402510-ACT

Il gene umano **CPT1C** codifica la carnitina palmitoiltransferasi 1C (CPT1-C), un membro atipico della famiglia CPT1, arricchito nel sistema nervoso, che collega il metabolismo lipidico all’omeostasi energetica e redox cellulare. A differenza delle CPT1A/B mitocondriali, che guidano direttamente la β-ossidazione degli acidi grassi a catena lunga, si ritiene che CPT1-C agisca come sensore metabolico, influenzando la gestione dei lipidi, le risposte allo stress del reticolo endoplasmatico e la segnalazione associata ad AMPK e mTOR, che collega lo stato nutrizionale alla funzione neuronale. L’attività di CPT1C è stata messa in relazione con la regolazione della composizione lipidica di membrana e con risposte adattative allo stress energetico, processi cruciali per il mantenimento delle sinapsi e la sopravvivenza neuronale. Alterazioni dell’espressione di CPT1C sono state riportate in contesti di neurodegenerazione, stress metabolico e rimodellamento metabolico delle cellule tumorali, rendendolo rilevante per studi meccanicistici dei programmi di segnalazione dipendenti dai lipidi.

CPT1-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CPT1C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CPT1-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CPT1C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CPT1C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CPT1-C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CPT1C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CPT1-C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CPT1-C nelle cellule tumorali con espressione di CPT1C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.