COX5b Plasmide Double Nickase (h): sc-405159-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COX5b Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COX5b Double Nickase Plasmid (h) e il COX5b Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COX5B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: COX5b Antibody (C-5): sc-374416
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COX5b Plasmide Double Nickase (h) | sc-405159-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COX5b Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405159-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COX5B codifica la subunità 5B della citocromo c ossidasi (COX5b), un componente del complesso IV mitocondriale codificato dal nucleo che contribuisce a regolare il trasferimento di elettroni dal citocromo c all’ossigeno e supporta un’efficiente fosforilazione ossidativa. Contribuendo al pompaggio di protoni e al potenziale di membrana mitocondriale, COX5b influenza la produzione di ATP, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e l’adattamento metabolico in condizioni variabili di ossigeno e nutrienti. La funzione di COX5B si intreccia con le vie della biogenesi mitocondriale e del controllo di qualità, inclusi l’assemblaggio della catena respiratoria e la mitofagia, che sono centrali nelle risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell’attività del complesso IV e la disfunzione mitocondriale associata a COX5B sono state collegate a difetti bioenergetici osservati in molteplici contesti patologici, inclusi fenotipi neuromuscolari e neurodegenerativi, nei quali le prestazioni mitocondriali limitano la sopravvivenza e la differenziazione cellulare.
COX5b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COX5B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COX5B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COX5B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COX5B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.