COX4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400616-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COX4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COX4 Double Nickase Plasmid (h) e il COX4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COX4I1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: COX4 Antibody (F-8): sc-376731
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COX4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400616-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COX4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400616-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COX4I1 codifica la subunità IV della citocromo c ossidasi, isoforma 1 (COX4), un componente regolatorio del complesso mitocondriale IV codificato dal nucleo, che modula il trasferimento di elettroni dal citocromo c all’ossigeno e sostiene il pompaggio di protoni per la fosforilazione ossidativa. COX4 integra la respirazione mitocondriale con l’omeostasi energetica cellulare e l’equilibrio redox, influenzando la produzione di ATP, la segnalazione mediata dalle specie reattive dell’ossigeno (ROS) e l’adattamento metabolico alla disponibilità di nutrienti e ossigeno. L’alterazione della funzione del complesso IV è associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale, tra cui compromissione della bioenergetica e risposte allo stress modificate, ed è spesso studiata in contesti quali neurodegenerazione, patologie cardiometaboliche e metabolismo tumorale. COX4I1 è quindi un bersaglio utile per analizzare il controllo della respirazione mitocondriale e il suo accoppiamento con programmi di sopravvivenza, proliferazione e differenziamento cellulare.
COX4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COX4I1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COX4I1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COX4I1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COX4I1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.