COL1A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400064-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL1A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL1A1 Double Nickase Plasmid (h) e il COL1A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL1A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: COL1A1 Antibody (H-7): sc-518272
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL1A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400064-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL1A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400064-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL1A1 codifica la catena pro-α1 del collagene di tipo I, un importante componente strutturale della matrice extracellulare che si assembla in collagene fibrillare e conferisce resistenza alla trazione ai tessuti connettivi. La sua biosintesi e maturazione comprendono processi nel RE, l’idrossilazione di prolina/lisina, la formazione della tripla elica, la secrezione e la fibrillogenesi extracellulare, collegando COL1A1 ai percorsi di organizzazione della ECM, adesione cellula–matrice e rimodellamento tissutale. L’espressione di COL1A1 è strettamente associata ai programmi di attivazione dei fibroblasti e a input di segnalazione come il TGF-β, che coordinano la deposizione di matrice e la riparazione delle ferite. Alterazioni genetiche o regolatorie di COL1A1 sono associate a fenotipi del tessuto connettivo e dello scheletro e sono ampiamente studiate nel contesto della fibrosi e del rimodellamento del microambiente tumorale.
COL1A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL1A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL1A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL1A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL1A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.