CKR-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402247-ACT

CCR1 (CKR-1) codifica un recettore per chemochine della famiglia dei GPCR che lega chemochine CC come CCL3, CCL5 e CCL7 per indirizzare la chemiotassi dei leucociti e il loro traffico nei tessuti. In seguito al legame con il ligando, CKR-1 attiva la segnalazione mediata da proteine G eterotrimeriche, che modula i flussi di calcio intracellulare, la segnalazione MAPK e le vie dipendenti da PI3K, coordinando adesione, migrazione e programmi genici infiammatori. L’attività di CCR1 modella il reclutamento delle cellule immunitarie nei microambienti infiammatori e si interseca con reti di citochine e chemochine che influenzano le dinamiche dei compartimenti mieloide e linfoide. Una segnalazione di CCR1 disregolata è stata collegata in letteratura a condizioni infiammatorie croniche e all’infiltrazione immunitaria associata ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulla migrazione immunitaria e sul crosstalk del microambiente.

CKR-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CKR-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CKR-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CKR-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CKR-1 nelle cellule tumorali con espressione di CCR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.