CIS Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419665-LAC

Il gene murino **Cish** codifica la **cytokine-inducible SH2-containing protein (CIS)**, un adattatore della famiglia **SOCS** che agisce da inibitore a feedback della segnalazione dei recettori delle citochine. CIS si lega a motivi recettoriali fosforilati e alle chinasi **JAK** associate per attenuare la fosforilazione a valle di **STAT**, modulando così gli output di segnalazione di vie quali **IL-2/IL-7** e delle risposte alle citochine correlate **γc**. Attraverso la regolazione della sensibilità alle citochine, CIS influenza i programmi di attivazione, proliferazione e differenziazione delle cellule immunitarie, con rilevanza per modelli di infiammazione, autoimmunità, biologia delle infezioni e immunologia dei tumori. Un’attività alterata di Cish viene quindi utilizzata per analizzare come la regolazione negativa della segnalazione **JAK–STAT** influenzi le transizioni di stato cellulare e le funzioni effettrici immunitarie in vivo e in vitro.

Le particelle di attivazione lentivirale CIS (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cish in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CIS (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cish, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CIS. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cish e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.