CHD5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402429-ACT

CHD5 (proteina 5 legante il DNA con cromodominio ed attività elicasica) è un rimodellatore della cromatina neuronale, arricchito nei neuroni e dipendente dall’ATP, appartenente alla famiglia SNF2, che coordina il posizionamento dei nucleosomi e i programmi trascrizionali necessari per la differenziazione e la stabilità del genoma. Attraverso i suoi cromodomini e la sua attività elicasica/ATPasi, CHD5 modula l’accessibilità della cromatina negli elementi regolatori e interagisce con vie epigenetiche che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e l’espressione genica specifica di linea cellulare. Una ridotta attività di CHD5 è stata associata a un controllo trascrizionale alterato e a instabilità cromosomica, e un’espressione di CHD5 modificata è spesso collegata a reti oncosoppressive nel neuroblastoma e in altre neoplasie. Nella ricerca biomedica, CHD5 è ampiamente studiata per i suoi ruoli nella dinamica della cromatina, nello sviluppo neuronale e nei meccanismi con cui la disregolazione epigenetica contribuisce a fenotipi rilevanti per la malattia.

CHD5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHD5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CHD5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHD5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHD5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CHD5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHD5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CHD5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CHD5 nelle cellule tumorali con espressione di CHD5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.