Cdk5 Plasmide Double Nickase (m): sc-419602-NIC

La chinasi ciclina‑dipendente 5 (Cdk5) del topo è una chinasi serina/treonina diretta dalla prolina che diventa cataliticamente attiva tramite associazione con cofattori non ciclinici come p35 (Cdk5r1) e p39 (Cdk5r2). Cdk5 regola la migrazione neuronale, la crescita dei neuriti, la dinamica delle vescicole sinaptiche e il rimodellamento del citoscheletro attraverso la fosforilazione di substrati nelle reti di microtubuli e actina, intersecandosi con la segnalazione MAPK e con vie chinasiche indipendenti dal ciclo cellulare. Un’attività di Cdk5 deregolata è stata collegata a fenotipi neurodegenerativi e neuroevolutivi tramite una fosforilazione alterata della tau e di altri substrati neuronali, oltre a un’omeostasi sinaptica compromessa. Oltre alla biologia del sistema nervoso, la segnalazione di Cdk5 contribuisce alle risposte allo stress e alla regolazione, dipendente dal contesto, di adesione e motilità, supportando studi meccanicistici in molteplici tipi cellulari.

Cdk5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cdk5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cdk5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cdk5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cdk5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.