Cdk5 Plasmide Double Nickase (h): sc-400161-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdk5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdk5 Double Nickase Plasmid (h) e il Cdk5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDK5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdk5 Antibody (J-3): sc-6247
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdk5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La chinasi ciclina-dipendente 5 (CDK5) codifica Cdk5, una chinasi serina/treonina diretta dalla prolina che viene attivata da cofattori non ciclinici come p35 (CDK5R1) e p39 (CDK5R2). Nelle cellule umane, Cdk5 regola lo sviluppo neuronale, la segnalazione sinaptica, il rimodellamento del citoscheletro, il traffico vescicolare e cascate di fosforilazione indipendenti dal ciclo cellulare attraverso substrati che intersecano le vie MAPK, PI3K/AKT e di risposta allo stress. Un’attività di Cdk5 deregolata e una fosforilazione aberrante dei substrati sono state collegate a processi neurodegenerativi, inclusa la patologia della tau, così come a programmi alterati di migrazione e sopravvivenza in molteplici contesti patologici. Poiché CDK5 influenza sia la dinamica della segnalazione sia la plasticità strutturale, è ampiamente studiato in modelli di neurobiologia, delle risposte al danno del DNA e del cross-talk tra vie di segnalazione guidato da reti di chinasi.
Cdk5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDK5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDK5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDK5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDK5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.