Cdk5 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419602-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdk5 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Cdk5 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Cdk5 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Cdk5 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Cdk5. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdk5 Antibody (J-3): sc-6247
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdk5 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-419602-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Cdk5 Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-419602-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
La chinasi 5 ciclina-dipendente (Cdk5) è una chinasi serina/treonina diretta verso la prolina che, a differenza delle CDK del ciclo cellulare, viene attivata principalmente nelle cellule post-mitotiche tramite l’associazione con p35/p39 e regola lo sviluppo e la funzione neuronale. Nel topo, Cdk5 controlla la dinamica del citoscheletro, la guida assonale, il traffico delle vescicole sinaptiche e la segnalazione dipendente dall’attività fosforilando substrati che modulano la stabilità dei microtubuli, l’endocitosi e le risposte trascrizionali. Interseca vie che governano la segnalazione del calcio, le cascate di chinasi e la proteostasi, integrando segnali che plasmano la morfologia neuronale e la plasticità delle reti. Un’attività di Cdk5 deregolata è stata collegata a meccanismi rilevanti per neurodegenerazione, neuroinfiammazione e fenotipi neuropsichiatrici, rendendola un bersaglio frequente per studi sulle risposte neuronali allo stress e sulle disfunzioni a livello di circuiti.
Cdk5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cdk5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Cdk5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cdk5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cdk5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdk5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cdk5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdk5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdk5 nelle cellule tumorali con espressione di Cdk5 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.