Cdc25A Plasmide Double Nickase (h): sc-400345-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdc25A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdc25A Double Nickase Plasmid (h) e il Cdc25A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDC25A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdc25A Antibody (F-6): sc-7389
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdc25A Plasmide Double Nickase (h) | sc-400345-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc25A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400345-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25A codifica Cdc25A, una fosfatasi a doppia specificità che attiva le chinasi ciclina-dipendenti rimuovendo i fosfati inibitori su CDK2 e CDK1, promuovendo così la transizione G1/S e la progressione della fase S. La sua attività è strettamente controllata dalla segnalazione dei checkpoint, inclusa la fosforilazione mediata da ATR/CHK1 che, in risposta a stress replicativo e danno al DNA, innesca la degradazione ubiquitina-dipendente. Attraverso queste vie, Cdc25A coordina la tempistica del ciclo cellulare con la sorveglianza dell’integrità del genoma e interagisce funzionalmente con reti collegate a p53 e RB. Un’espressione o una stabilità deregolate di CDC25A sono frequentemente associate a fenotipi di proliferazione aberrante e vengono studiate nel contesto della segnalazione oncogenica e di difetti dei checkpoint.
Cdc25A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC25A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC25A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC25A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC25A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.