CD47 Plasmide Double Nickase (h): sc-400508-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD47 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD47 Double Nickase Plasmid (h) e il CD47 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD47. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD47 Antibody (B6H12): sc-12730
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD47 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400508-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD47 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400508-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD47 codifica una proteina di membrana appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, ampiamente espressa, che funge da regolatore chiave della comunicazione cellula-cellula e del riconoscimento del “sé”. Attraverso il legame con SIRPα sulle cellule mieloidi, CD47 modula cascate di segnalazione inibitorie che influenzano la fagocitosi, la sorveglianza immunitaria innata e l’omeostasi infiammatoria, interagendo inoltre con la trombospondina-1 per modulare l’adesione e le risposte migratorie. CD47 partecipa a processi legati al rimodellamento del citoscheletro e alla segnalazione associata alle integrine, con effetti sul traffico dei leucociti e sul rimodellamento dei tessuti. Un’espressione e una segnalazione di CD47 deregolate sono state associate a fenotipi di evasione immunitaria in ambito oncologico e a meccanismi di clearance alterati in contesti di ricerca su patologie ematologiche e infiammatorie.
CD47 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD47 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD47. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD47. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD47 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.