CD47 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400508-ACT

Il gene umano **CD47** codifica una proteina di superficie cellulare ampiamente espressa appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, che funge da segnale di riconoscimento del “self” e da recettore di adesione. CD47 interagisce con **SIRPα** sulle cellule mieloidi per modulare la fagocitosi e la sorveglianza immunitaria, e si lega anche alla **trombospondina-1** influenzando la segnalazione delle integrine, la dinamica del citoscheletro e la migrazione cellulare. Attraverso queste interazioni, CD47 contribuisce a processi quali il traffico leucocitario, la biologia vascolare e piastrinica e la regolazione delle risposte infiammatorie. Un’espressione deregolata di CD47 è stata associata ad alterate interazioni tra tumore e sistema immunitario, a neoplasie ematologiche e a patologie infiammatorie o fibrotiche, rendendolo un bersaglio frequente per studi meccanicistici sull’evasione immunitaria e sul rimodellamento del microambiente tissutale.

CD47 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD47 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD47 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD47 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD47, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD47. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD47 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD47 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD47 nelle cellule tumorali con espressione di CD47 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.