CD46 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400968-ACT

CD46 umano (proteina cofattore di membrana) è una glicoproteina regolatrice del complemento ampiamente espressa che protegge le cellule dell’ospite dal danno mediato dal complemento fungendo da cofattore per la scissione di C3b e C4b dipendente dal fattore I. Oltre al controllo del complemento, CD46 influenza la segnalazione cellulare e la modulazione immunitaria, includendo la regolazione dell’attivazione e della differenziazione delle cellule T e l’integrazione con le vie infiammatorie. CD46 funge anche da recettore cellulare per molteplici patogeni, collegando la sua espressione alle interazioni ospite–patogeno e all’immunità mucosale. Un’attività o un’espressione deregolata di CD46 è associata a patologie guidate dal complemento e a disfunzioni immunitarie, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in immunologia, biologia delle infezioni e segnalazione di superficie cellulare.

CD46 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD46 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD46 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD46 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD46, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD46. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD46 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD46 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD46 nelle cellule tumorali con espressione di CD46 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.