CD45RC Plasmide Double Nickase (h): sc-400245-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD45 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD45 Double Nickase Plasmid (h) e il CD45 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PTPRC. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD45 Antibody (35-Z6): sc-1178
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD45RC Plasmide Double Nickase (h) | sc-400245-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD45 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400245-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTPRC codifica CD45RC, un’isoforma dell’antigene comune dei leucociti (CD45), una fosfatasi tirosinica proteica di tipo recettoriale che regola le soglie di segnalazione nelle cellule ematopoietiche. De-fosforilando le chinasi della famiglia Src e altri componenti prossimali, CD45RC modula la segnalazione dei recettori antigenici, la risposta alle citochine e vie a valle come MAPK/ERK e JAK/STAT, che determinano l’attivazione e la differenziazione dei linfociti. Lo splicing alternativo di PTPRC genera isoforme di CD45 con distribuzioni immunofenotipiche distinte, rendendo CD45RC utile per distinguere sottopopolazioni di cellule immunitarie e stati di attivazione. Un’attività fosfatasica di CD45 deregolata e un’espressione alterata delle isoforme sono state associate a disfunzioni immunitarie e a meccanismi di malattie infiammatorie, a supporto della sua rilevanza in immunologia e nei modelli di ricerca ematologica.
CD45 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PTPRC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PTPRC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PTPRC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PTPRC interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.