CD39 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419549-LAC

Entpd1 codifica l’ectonucleotidasi CD39 (ENTPD1), un enzima di superficie cellulare che idrolizza l’ATP e l’ADP extracellulari in AMP, modellando la segnalazione purinergica nei compartimenti vascolare, immunitario e stromale del topo. Regolando la disponibilità di nucleotidi, CD39 influenza la segnalazione infiammatoria, le risposte piastriniche ed endoteliali e l’equilibrio tra i segnali di pericolo guidati dall’ATP e le vie immunoregolatorie che generano adenosina, in concerto con CD73. L’attività di CD39 è associata alla modulazione dell’attivazione leucocitaria, della produzione di citochine e delle risposte al danno tissutale, rendendo Entpd1 un bersaglio rilevante in modelli di infiammazione, trombosi, danno da ischemia-riperfusione e regolazione immunitaria associata al tumore. La sua espressione viene comunemente studiata nelle cellule T regolatorie, nelle popolazioni mieloidi e nell’endotelio, dove il metabolismo dei nucleotidi extracellulari controlla la comunicazione cellula-cellula.

Le particelle di attivazione lentivirale CD39 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Entpd1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD39 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Entpd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD39. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Entpd1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.