CD38 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401117-LAC

Il gene umano CD38 codifica un ectoenzima e recettore transmembrana di tipo II che catalizza il metabolismo del NAD+ generando secondi messaggeri come l’ADP-ribosio ciclico e l’ADP-ribosio, regolando così la mobilizzazione intracellulare di Ca2+. L’attività di CD38 integra lo stato metabolico con processi di segnalazione che influenzano l’attivazione, la differenziazione, l’adesione e le risposte citochiniche dei linfociti, con ulteriori ruoli nel bilanciamento redox cellulare attraverso vie dipendenti dal NAD+. CD38 è fortemente espresso in sottopopolazioni di cellule immunitarie ed è spesso studiato nel contesto dell’immunometabolismo, della segnalazione infiammatoria e delle interazioni tumore–sistema immunitario. Un’espressione o una funzione enzimatica deregolate di CD38 sono state associate ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria e della segnalazione del microambiente nelle neoplasie ematologiche e in altre malattie in cui il consumo di NAD+ e la segnalazione dipendente dal Ca2+ risultano perturbati.

Le particelle di attivazione lentivirale CD38 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CD38 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD38 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CD38, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD38. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CD38 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.