CD3-ζ/η Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419556

Panoramica

Cd247 codifica la subunità di segnalazione CD3ζ/η del complesso del recettore delle cellule T (TCR), un adattatore contenente motivi di attivazione basati su tirosina tipici degli immunorecettori (ITAM) che collega il riconoscimento dell’antigene alle cascate intracellulari di fosforilazione. In seguito all’ingaggio del TCR, gli ITAM di CD3ζ/η reclutano e attivano chinasi come LCK e ZAP70, favorendo l’assemblaggio del signalosoma LAT/SLP-76 e l’attivazione a valle delle vie MAPK, NF-κB e NFAT, che regolano l’attivazione delle cellule T, la produzione di citochine e la sopravvivenza. Un’alterata espressione o segnalazione di CD247 contribuisce a una ridotta responsività delle cellule T e alla disregolazione immunitaria, ed è stata associata a fenotipi infiammatori e autoimmuni, nonché all’elusione della risposta immune da parte dei tumori nel microambiente. Nei topi, la perturbazione di Cd247 è ampiamente utilizzata per analizzare la selezione timica, la tolleranza periferica e gli stati delle cellule T effettrici rispetto a quelli esausti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD3-ζ/η (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd247 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd247 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd247 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD3-ζ/η.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd247 per lo studio della segnalazione di CD3-ζ/η, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd247 critici per la funzione di CD3-ζ/η
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd247 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd247. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD3-ζ/η Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD3-ζ/η (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd247 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd247 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.