CD27 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401938-ACT

CD27 codifica una molecola costimolatoria della superfamiglia dei recettori del TNF, espressa principalmente sulle cellule T, sulle cellule B della memoria e su sottopopolazioni di cellule NK, dove si lega a CD70 per amplificare l’attivazione dei linfociti guidata dall’antigene. La segnalazione di CD27 coinvolge le vie canonica e non canonica di NF-κB insieme alle cascate MAPK e PI3K/AKT, sostenendo proliferazione, sopravvivenza, produzione di citochine e lo sviluppo di una memoria immunitaria duratura. Grazie al suo ruolo nel modulare le risposte effettrici e di memoria, un’attività alterata dell’asse CD27/CD70 è stata associata a disregolazione immunitaria e a microambienti infiammatori, e l’espressione di CD27 è spesso utilizzata per definire fenotipicamente gli stati di differenziazione dei linfociti. Queste proprietà rendono CD27 un nodo utile per studiare le reti di segnalazione dell’immunità adattativa, la costimolazione cellula-cellula e la disfunzione immunitaria dipendente dal contesto.

CD27 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD27 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD27 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD27 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD27, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD27. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD27 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD27 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD27 nelle cellule tumorali con espressione di CD27 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.