CD26 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400862-ACT

DPP4 codifica CD26, una glicoproteina transmembrana di tipo II con attività dipeptidil-peptidasica che tronca selettivamente chemiochine, incretine e altri peptidi bioattivi, modellando così i gradienti di segnalazione extracellulari e il traffico delle cellule immunitarie. Oltre alla funzione di processamento enzimatico, CD26 partecipa alla segnalazione costimolatoria e a processi legati all’adesione attraverso interazioni con la matrice extracellulare e con partner presenti sulla superficie cellulare, influenzando l’attivazione delle cellule T e le risposte infiammatorie. Nei tessuti umani, l’espressione di DPP4/CD26 è stata collegata a vie che regolano la migrazione leucocitaria, la segnalazione delle citochine e la regolazione metabolica. Un’attività o un’espressione deregolate di CD26 sono studiate in contesti che includono l’infiammazione mediata dal sistema immunitario, la biologia del microambiente tumorale e i meccanismi delle malattie metaboliche.

CD26 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DPP4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD26 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DPP4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DPP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD26. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DPP4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD26 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD26 nelle cellule tumorali con espressione di DPP4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.