CD26 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400862-ACT

DPP4 codifica a CD26, uma glicoproteína transmembranar do tipo II com atividade de dipeptidil peptidase que cliva/trunca seletivamente certas quimiocinas, incretinas e outros peptídeos bioativos, moldando assim gradientes de sinalização extracelular e o tráfego de células imunes. Para além do processamento enzimático, a CD26 participa em sinalização coestimuladora e em processos relacionados com adesão por meio de interações com a matriz extracelular e parceiros na superfície celular, influenciando a ativação de células T e respostas inflamatórias. Em tecidos humanos, a expressão de DPP4/CD26 tem sido associada a vias que regulam a migração de leucócitos, a sinalização por citocinas e a regulação metabólica. A atividade ou expressão desregulada de CD26 é estudada em contextos que incluem inflamação mediada pelo sistema imune, biologia do microambiente tumoral e mecanismos de doenças metabólicas.

CD26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DPP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DPP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DPP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD26. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DPP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD26 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD26 em células tumorais com expressão de DPP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.