CD137 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423447-ACT

Il gene murino **Tnfrsf9** codifica **CD137 (4-1BB)**, una molecola costimolatoria inducibile della superfamiglia dei recettori del TNF espressa sui linfociti T attivati e su altre sottopopolazioni immunitarie. L’attivazione di CD137 promuove sopravvivenza, proliferazione e differenziazione effettrice attraverso una segnalazione dipendente da TRAF che attiva le vie di NF-κB e MAPK, modulando la produzione di citochine e le risposte citotossiche. Questo asse contribuisce alla regolazione dell’omeostasi immunitaria, della segnalazione infiammatoria e dell’immunità antivirale e antitumorale, ed è frequentemente studiato in modelli di autoimmunità, infezione e immunologia dei tumori. Una segnalazione di CD137 disregolata può alterare l’esaurimento dei linfociti T, la formazione della memoria e il crosstalk tra compartimenti mieloide e linfoide, rendendo **Tnfrsf9** un nodo prezioso per studi meccanicistici sulla modulazione immunitaria.

CD137 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Tnfrsf9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD137 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Tnfrsf9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Tnfrsf9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD137. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Tnfrsf9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD137 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD137 nelle cellule tumorali con espressione di Tnfrsf9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.