CD137 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405068-ACT

TNFRSF9 codifica CD137 (4-1BB), un recettore costimolatorio inducibile della superfamiglia dei recettori del TNF, espresso prevalentemente sui linfociti T attivati e su altri sottogruppi immunitari. In seguito al legame, CD137 trasduce il segnale tramite proteine adattatrici TRAF attivando le vie NF-κB canonica e non canonica, MAPK e PI3K/AKT, promuovendo la sopravvivenza cellulare, la produzione di citochine e il mantenimento della funzione effettrice. La segnalazione dipendente da CD137 modella i programmi di attivazione e tolleranza immunitaria, influenzando l’espansione dei linfociti T, la formazione della memoria e le interazioni con le cellule presentanti l’antigene. Un’attività disregolata di TNFRSF9/CD137 è stata associata a infiammazione mediata dal sistema immunitario e ad alterazioni del microambiente immunitario tumorale, rendendolo un utile punto di leva molecolare per studi meccanicistici della regolazione immunitaria.

CD137 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNFRSF9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD137 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNFRSF9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNFRSF9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD137. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNFRSF9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD137 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD137 nelle cellule tumorali con espressione di TNFRSF9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.