CCDC57 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427913

Panoramica

Ccdc57 codifica la proteina CCDC57 contenente un dominio coiled-coil, un fattore previsto associato al citoscheletro e agli organelli, implicato nell’organizzazione di processi dipendenti dai microtubuli. Le proteine coiled-coil agiscono spesso da scaffold che поддержano l’integrità del centrosoma, il traffico intracellulare e la progressione del ciclo cellulare, collegando CCDC57 a vie che regolano la dinamica del fuso mitotico e la regolazione spaziale della segnalazione. Nei sistemi murini, l’alterazione di proteine appartenenti a queste reti viene comunemente studiata per valutarne gli effetti su proliferazione, stabilità genomica e differenziamento cellulare. Di conseguenza, CCDC57 è rilevante per ambiti di ricerca meccanicistica che si intersecano con fenotipi dello sviluppo e difetti associati a malattia nell’organizzazione del citoscheletro e nel controllo mitotico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC57 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccdc57 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccdc57 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccdc57 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCDC57.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccdc57 per lo studio della segnalazione di CCDC57, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccdc57 critici per la funzione di CCDC57
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccdc57 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CCDC57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CCDC57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccdc57. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CCDC57 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CCDC57 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccdc57 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccdc57 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.