CBP/KAT3A/CREBBP Plasmide Double Nickase (h): sc-400200-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CBP/KAT3A/CREBBP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CBP/KAT3A/CREBBP Double Nickase Plasmid (h) e il CBP/KAT3A/CREBBP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CREBBP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CBP/KAT3A/CREBBP Antibody (C-1): sc-7300
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CBP/KAT3A/CREBBP Plasmide Double Nickase (h) | sc-400200-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CBP/KAT3A/CREBBP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400200-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CREBBP codifica la CREB-binding protein (CBP/KAT3A), un coattivatore nucleare della trascrizione e acetiltransferasi delle lisine che acetila gli istoni e numerosi substrati non istonici per regolare l’accessibilità della cromatina e l’espressione genica. CBP integra segnali provenienti da CREB, dai recettori nucleari e da fattori di trascrizione dello sviluppo, modellando programmi che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte al danno del DNA. Attraverso il suo bromodominio e l’attività KAT, CBP coordina la funzione degli enhancer e l’allungamento trascrizionale in molteplici reti di segnalazione, incluse le vie dipendenti da cAMP/CREB. Alterazioni della funzione di CREBBP e la disregolazione epigenetica sono associate a fenotipi di neurosviluppo e a diverse neoplasie, rendendolo un nodo ampiamente studiato nel controllo trascrizionale e nella biologia della cromatina.
CBP/KAT3A/CREBBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CREBBP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CREBBP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CREBBP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CREBBP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.