Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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caspase-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419468
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- caspase-7 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico caspase-7, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: caspase-7 p10 Antibody (B-3): sc-365034
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
caspase-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419468 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene Casp7 del topo codifica la caspasi-7, una proteasi esecutrice cisteina-aspartato che viene attivata a valle delle caspasi iniziatrici durante l’apoptosi intrinseca ed estrinseca. Una volta processata, la caspasi-7 scinde molteplici substrati cellulari per indurre la caratteristica morfologia apoptotica e contribuisce a programmi di morte cellulare regolata legati alla segnalazione mitocondriale, alle vie dei recettori di morte e allo stress della proteostasi. L’attività della caspasi-7 si interfaccia con la segnalazione infiammatoria e immunitaria attraverso un crosstalk con le reti di caspasi e può influenzare il rimodellamento tissutale e le risposte allo stress citotossico. Un’apoptosi deregolata che coinvolge CASP7 è stata implicata in fenotipi rilevanti per la biologia del cancro, la neurodegenerazione e la patologia immuno-mediata, rendendo Casp7 un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo del destino cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO caspase-7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Casp7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Casp7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Casp7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina caspase-7.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Casp7 per lo studio della segnalazione di caspase-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Casp7 critici per la funzione di caspase-7
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Casp7 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal caspase-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal caspase-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Casp7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal caspase-7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR caspase-7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Casp7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Casp7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.