casein kinase IIα′ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401148-ACT

CSNK2A2 codifica la subunità catalitica alfa′ della caseina chinasi II, una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che si associa a subunità regolatorie beta per formare l’oloenzima CK2. CK2 fosforila un ampio spettro di substrati coinvolti nell’organizzazione della cromatina, nella trascrizione e nel processamento dell’RNA, nella progressione del ciclo cellulare e nelle risposte al danno del DNA, integrando segnali tra vie quali Wnt/β-catenina, NF-κB, PI3K/AKT e MAPK. Attraverso queste funzioni a livello di rete, CSNK2A2 contribuisce alla regolazione della proliferazione, dell’adattamento allo stress e dell’apoptosi, risultando rilevante per studi meccanicistici della segnalazione oncogenica, dei processi di neurosviluppo e della modulazione delle vie infiammatorie. Un’attività di CK2 deregolata e un’alterata espressione di CSNK2A2 sono state associate alla biologia dei tumori, a programmi di fosforilazione anomali e a un’omeostasi cellulare compromessa in molteplici contesti patologici.

casein kinase IIα′ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CSNK2A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

casein kinase IIα′ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CSNK2A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CSNK2A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di casein kinase IIα′. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CSNK2A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da casein kinase IIα′ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via casein kinase IIα′ nelle cellule tumorali con espressione di CSNK2A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.