CaMKI Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401136-ACT

Il gene umano **CAMK1** codifica **CaMKI**, una chinasi serina/treonina dipendente da calcio/calmodulina che traduce i segnali intracellulari di Ca2+ in eventi di fosforilazione che controllano programmi trascrizionali, dinamiche del citoscheletro e progressione del ciclo cellulare. CaMKI si integra nelle reti di segnalazione Ca2+/CaM e può collegare l’attività neuronale all’espressione genica attraverso cascate di chinasi a valle e vie legate a CREB, supportando la crescita dei neuriti e processi correlati alla plasticità sinaptica. Al di là del sistema nervoso, l’attività di CAMK1 è stata implicata in contesti di segnalazione più ampi che influenzano proliferazione e risposte allo stress, rendendola rilevante per studi meccanicistici della disregolazione della segnalazione osservata in diverse malattie complesse. Un’alterazione della segnalazione delle chinasi Ca2+-dipendenti è frequentemente associata a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, nonché alla riorganizzazione delle vie di segnalazione associata al cancro, collocando CAMK1 come un nodo utile per l’analisi delle pathway.

CaMKI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAMK1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CaMKI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAMK1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAMK1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CaMKI. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAMK1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CaMKI nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CaMKI nelle cellule tumorali con espressione di CAMK1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.