Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Calpastatin Plasmide Double Nickase (h): sc-401502-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Calpastatin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Calpastatin Double Nickase Plasmid (h) e il Calpastatin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CAST. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Calpastatin Antibody (A-1): sc-376547
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Calpastatin Plasmide Double Nickase (h) | sc-401502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calpastatin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano CAST codifica la calpastatina, l’inibitore endogeno e altamente specifico delle proteasi cisteiniche calcio-dipendenti calpaina-1 e calpaina-2. Limitando la proteolisi controllata mediata dalle calpaine, la calpastatina contribuisce a regolare il rimodellamento del citoscheletro, il turnover delle adesioni focali, il traffico di membrana e gli eventi di trasduzione del segnale collegati alla dinamica del Ca2+ e alle cascate di fosforilazione. L’attività di CAST influenza la proteostasi e i programmi di sopravvivenza cellulare modulando il clivaggio di substrati coinvolti in apoptosi, infiammazione e omeostasi neuronale e muscolare. Uno squilibrio nella regolazione calpaina–calpastatina è stato associato a vie rilevanti per neurodegenerazione, risposte cardiovascolari al danno e invasione delle cellule tumorali, sostenendo CAST come nodo meccanicistico per lo studio della proteolisi regolata dal Ca2+.
Calpastatin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAST nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAST. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAST. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAST interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.