Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Calpastatin Double Nickase Plasmid (h): sc-401502-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Calpastatin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Calpastatin Double-Nickase-Plasmid (h) und Calpastatin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CAST abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Calpastatin: sc-376547
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Calpastatin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calpastatin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CAST kodiert Calpastatin, den endogenen und hochspezifischen Inhibitor der calciumabhängigen Cysteinproteasen Calpain‑1 und Calpain‑2. Durch die Begrenzung der durch Calpains vermittelten, „limitierten“ Proteolyse trägt Calpastatin zur Regulation von Zytoskelett-Remodelling, Turnover fokaler Adhäsionen, Membrantransport und Signaltransduktionsereignissen bei, die mit Ca2+-Dynamik und Phosphorylierungskaskaden verknüpft sind. Die CAST-Aktivität beeinflusst Proteostase und Zellüberlebensprogramme, indem sie die Spaltung von Substraten moduliert, die an Apoptose, Entzündung sowie neuronaler und muskulärer Homöostase beteiligt sind. Ein dysreguliertes Gleichgewicht zwischen Calpain und Calpastatin wird mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, kardiovaskuläre Schadensantworten und die Invasion von Krebszellen relevant sind, was CAST als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung Ca2+-regulierter Proteolyse stützt.
Calpastatin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAST-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAST abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAST-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAST-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.