Calpain 15 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411016-LAC

CAPN15 codifica la calpaina 15, un membro atipico della famiglia delle proteasi a cisteina calcio-dipendenti, coinvolto nella proteolisi regolata e nel rimodellamento delle proteine all’interno delle cellule. La segnalazione delle calpaine influenza la dinamica del citoscheletro, il traffico di membrana e la modulazione dipendente dal contesto delle reti di segnalazione che plasmano la morfologia cellulare e le risposte allo stress. L’espressione di CAPN15 e l’attività della via delle calpaine sono state studiate in relazione ai processi di neurosviluppo e all’omeostasi cellulare, ambiti in cui una regolazione alterata delle proteasi può influire sulla connettività neuronale e sul mantenimento dei tessuti. In quanto gene umano, CAPN15 rappresenta un nodo utile per studiare la proteostasi, l’integrazione della segnalazione intracellulare e i fenotipi associati a un controllo proteolitico deregolato.

Le particelle di attivazione lentivirale Calpain 15 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CAPN15 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Calpain 15 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CAPN15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Calpain 15. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CAPN15 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.