cadherin-16 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401598-ACT

CDH16 codifica la caderina-16, una molecola di adesione cellula-cellula dipendente dal calcio, arricchita nei tessuti epiteliali, in particolare nei compartimenti tubulari renali, dove sostiene l’architettura tissutale e la polarità epiteliale. Attraverso l’organizzazione delle giunzioni aderenti e il coordinamento con il rimodellamento del citoscheletro, la caderina-16 contribuisce alla segnalazione dipendente dal contatto e al mantenimento di stati epiteliali differenziati. Alterazioni dell’espressione di CDH16 sono state associate a una compromissione dell’integrità epiteliale e sono state investigate in contesti quali lo sviluppo del rene, la fisiologia renale e la biologia delle neoplasie epiteliali. In quanto marcatore di adesione associato alla linea cellulare, la caderina-16 è spesso utilizzata per studiare l’identità epiteliale, la stabilità delle giunzioni e i programmi di differenziamento delle cellule renali.

cadherin-16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH16 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cadherin-16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH16 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH16, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cadherin-16. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH16 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cadherin-16 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cadherin-16 nelle cellule tumorali con espressione di CDH16 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.