CA IX Plasmide Double Nickase (m): sc-432920-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CA IX Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CA IX Double Nickase Plasmid (m) e il CA IX Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Car9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CA IX Plasmide Double Nickase (m) | sc-432920-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA IX Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432920-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Car9 codifica l’anidrasi carbonica IX (CA IX), una metalloenzima zinco-dipendente associata alla membrana che catalizza l’idratazione reversibile della CO₂, regolando il pH extracellulare e intracellulare. Nei tessuti murini, CA IX sostiene l’accoppiamento con il trasporto di bicarbonato e l’omeostasi acido–base, collegando l’attività dell’anidrasi carbonica ai processi di trasporto ionico che influenzano il metabolismo cellulare e il pH del microambiente. L’espressione di Car9 è comunemente associata a programmi responsivi all’ipossia e all’adattamento al microambiente, rendendolo rilevante per studiare come il controllo del pH modelli le risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell’attività e della localizzazione di CA IX sono spesso esaminate in modelli di deregolazione dell’ossigenazione tissutale, infiammazione e rimodellamento metabolico di tipo tumorale.
CA IX Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Car9 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Car9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Car9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Car9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.