CA III Plasmide Double Nickase (h): sc-403538-NIC

Il gene umano **CA3** codifica per l’anidrasi carbonica III (CA III), una metalloenzima citosolico allo zinco che catalizza l’idratazione reversibile della CO₂ in bicarbonato e protoni, sostenendo il controllo del pH intracellulare e il tamponamento CO₂/HCO₃⁻. La CA III è altamente espressa nel muscolo scheletrico ossidativo e contribuisce all’omeostasi redox grazie a residui di cisteina reattivi che possono essere S-glutationilati, collegandola alle risposte cellulari allo stress ossidativo. Modulando l’equilibrio acido–base e processi sensibili allo stato redox, la CA III si interseca con la regolazione metabolica e con vie di adattamento allo stress rilevanti per la fisiologia muscolare. Alterazioni dell’espressione di CA3 e dell’attività della CA III sono state riportate in contesti di disfunzione muscolare e di stress metabolico, rendendola un utile marcatore e un nodo meccanicistico per lo studio del metabolismo cellulare e del danno ossidativo.

CA III Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.