C5L2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410578

Panoramica

C5AR2 codifica C5L2, un recettore atipico del complemento che lega l’anafilotossina C5a e C5a des-Arg, modulando la segnalazione leucocitaria guidata dal complemento e il tono infiammatorio. A differenza del recettore canonico C5aR1, C5L2 è spesso descritto come non accoppiato alle proteine G e può modulare la segnalazione mediata da β-arrestina, il cross-talk tra recettori e le risposte a valle associate a MAPK/NF-κB nelle cellule mieloidi e in quelle residenti nei tessuti. Attraverso il suo ruolo nelle vie del complemento e dell’immunità innata, C5AR2 influenza la chemiotassi, la produzione di citochine e i programmi di risoluzione che si intersecano con l’infiammazione cardiometabolica e le risposte al danno tissutale. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di C5AR2 sono state studiate in contesti di infiammazione sistemica di tipo settico, aterosclerosi e disturbi metabolici, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico nei modelli di malattie infiammatorie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C5L2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C5AR2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C5AR2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C5AR2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C5L2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C5AR2 per lo studio della segnalazione di C5L2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C5AR2 critici per la funzione di C5L2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C5AR2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C5L2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C5L2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C5AR2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C5L2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C5L2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C5AR2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C5AR2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.