C/EBP beta Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400125-ACT

CEBPB codifica il fattore di trascrizione C/EBP beta, una proteina bZIP (basic leucine zipper) che regola programmi genici responsivi agli stimoli e che controllano infiammazione, segnalazione dell’immunità innata, progressione del ciclo cellulare e differenziamento cellulare. C/EBP beta integra segnali provenienti da vie attivate da citochine e stress, tra cui la segnalazione NF-κB, JAK/STAT e MAPK, per modulare output trascrizionali che plasmano l’attivazione dei macrofagi, l’adipogenesi e la plasticità delle cellule epiteliali. Un’alterata attività di CEBPB è stata associata a stati infiammatori deregolati e a processi di rimodellamento, ed è spesso studiata in contesti quali disfunzioni metaboliche, fibrosi e reti trascrizionali oncogeniche. Queste proprietà rendono C/EBP beta un nodo centrale per comprendere come i segnali extracellulari vengano convertiti in programmi di espressione genica specifici per linea cellulare e contesto.

C/EBP beta Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CEBPB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C/EBP beta Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CEBPB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CEBPB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C/EBP beta. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CEBPB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C/EBP beta nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C/EBP beta nelle cellule tumorali con espressione di CEBPB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.