BVES Plasmide Double Nickase (h): sc-403698-NIC

BVES (blood vessel epicardial substance), noto anche come POPDC1, codifica una proteina associata alla membrana, arricchita nei tessuti epiteliali e muscolari, che contribuisce all’adesione cellula-cellula, all’organizzazione della membrana e alla regolazione dei microdomini di segnalazione. BVES partecipa a processi responsivi ai nucleotidi ciclici e interagisce con vie che controllano la dinamica del citoscheletro, l’integrità delle giunzioni serrate e la polarizzazione epiteliale, influenzando la motilità cellulare e l’architettura tissutale. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di BVES sono state associate a una compromissione dell’omeostasi epiteliale e a cambiamenti dei fenotipi proliferativi e migratori, rendendolo rilevante per studi di biologia tumorale e rimodellamento dei tessuti. In ambito cardiovascolare e della muscolatura liscia, BVES è stato collegato a segnalazione responsiva allo stress e alla fisiologia della conduzione, supportandone l’impiego in modelli di sviluppo e funzione muscolare.

BVES Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BVES nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BVES. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BVES. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BVES interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.