BTN3A1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404202-ACT

BTN3A1 (butirofilina della sottofamiglia 3, membro A1, CD277) è una proteina umana immunoregolatoria di tipo I, transmembrana, che svolge un ruolo nel riconoscimento degli antigeni e nella modulazione dei linfociti T, influenzando in particolare l’attivazione dei linfociti T Vγ9Vδ2 attraverso una segnalazione dipendente dai fosfoantigeni. Partecipa all’organizzazione della sinapsi immunologica e alle vie di segnalazione a valle che regolano l’attivazione linfocitaria, la produzione di citochine e le risposte citotossiche. L’espressione di BTN3A1 e le dinamiche della sua segnalazione sono spesso oggetto di studio nell’immunologia dei tumori e nella biologia dell’infiammazione, dove una regolazione alterata può rimodellare la sorveglianza immunitaria e le risposte cellulari allo stress. In quanto mediatore di superficie cellulare simile a un checkpoint, BTN3A1 rappresenta un nodo accessibile per studiare in vitro le soglie di attivazione immunitaria e le interazioni tra sistema immunitario e tumore.

BTN3A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BTN3A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BTN3A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BTN3A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BTN3A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BTN3A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BTN3A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BTN3A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BTN3A1 nelle cellule tumorali con espressione di BTN3A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.