BTBD14B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410250-LAC

NACC1 codifica BTBD14B, un fattore nucleare contenente un dominio BTB/POZ implicato nel controllo trascrizionale e nella regolazione associata alla cromatina attraverso interazioni proteina–proteina. Questo gene è stato collegato a programmi che governano la proliferazione, la sopravvivenza e la differenziazione cellulare, con effetti a valle su vie che modellano la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress. Un’espressione alterata di NACC1 è stata riportata in molteplici contesti patologici, inclusi la biologia dei tumori e fenotipi del neurosviluppo, a supporto del suo impiego come nodo funzionale negli studi sulle reti regolatorie. In quanto fattore associato alla trascrizione, BTBD14B viene spesso studiato per il suo contributo agli stati di espressione genica e alla plasticità cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale BTBD14B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NACC1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BTBD14B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NACC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BTBD14B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NACC1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.