Brn-3c/BRN3C/POU4F3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401701-ACT

POU4F3 (Brn-3c/BRN3C) è un fattore di trascrizione con dominio POU che regola programmi di espressione genica necessari per la differenziazione e il mantenimento delle cellule sensoriali, con ruoli ben caratterizzati nello sviluppo delle cellule ciliate dell’orecchio interno e nella specificazione delle linee neuronali. Legandosi a motivi di DNA simili all’octamer, BRN3C coordina reti trascrizionali che si intersecano con la segnalazione dello sviluppo e con il controllo dell’identità cellulare mediato dalla cromatina. Un’attività o un’espressione alterata di POU4F3 è stata associata a deficit uditivi ereditari ed è spesso studiata nel contesto della sopravvivenza delle cellule ciliate, delle risposte allo stress e della degenerazione. Queste proprietà rendono POU4F3 un marcatore utile e un nodo meccanicistico per analizzare la regolazione trascrizionale nella neurobiologia sensoriale.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di POU4F3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus POU4F3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione POU4F3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Brn-3c/BRN3C/POU4F3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus POU4F3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Brn-3c/BRN3C/POU4F3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Brn-3c/BRN3C/POU4F3 nelle cellule tumorali con espressione di POU4F3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.