Brm Plasmide Double Nickase (m): sc-426415-NIC

Il gene murino **Smarca2** codifica **Brm (SMARCA2)**, una subunità elicasi ATP-dipendente del complesso di rimodellamento della cromatina **SWI/SNF (BAF)**, che riposiziona i nucleosomi per regolare i programmi trascrizionali. Brm contribuisce a coordinare l’accessibilità di enhancer e promotori in vie di segnalazione che controllano la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea, le risposte al danno al DNA e la differenziazione. Un’alterata attività di SWI/SNF, inclusa la compromissione della funzione di SMARCA2/BRM o della composizione del complesso, è associata alla disregolazione epigenetica osservata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, come la biologia del cancro e i processi di neuro-sviluppo. Smarca2 è quindi ampiamente studiato per il suo ruolo nell’architettura della cromatina, nella cooperatività dei fattori di trascrizione e nella stabilità del genoma nelle cellule dei mammiferi.

Brm Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Smarca2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Smarca2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Smarca2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Smarca2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.